高压锅内，保持在两个气压，大约需要3个小时，常温需要经过十个小时以上的高温灭菌。然后冷却至常温备用。三，准备接种箱进行接种。一般，秋季栽培的菌种在夏季进行制种。春季栽培的菌种在冬季制种。一般采用气雾剂杀菌40分钟后，可进行操作接种。将原菌种块制成，黄豆粒大小的块状进行接种。将接种完的菌袋放于恒温室内的菌架上。
种蘑菇的菌种怎么自繁？
种植蘑菇的菌种是可以自繁的，但不知是想繁殖几级种。种植蘑菇的菌种分为三种，分别是母种、原种、栽培种。其中母种叫一级种，原种叫二级种，栽培种叫三级种。母种，就是用蘑菇菌丝或孢子在试管培养基中培养出的菌种，也叫试管种，用于扩繁原种和菌种保存。原种，就是由母种扩大繁殖而得到的菌种，原种用来扩大繁殖栽培种，也可直接用于栽培。
栽培种，就是由原种扩大繁殖而得到的菌种，用于蘑菇生产。一，母种扩繁原种前的转管操作。母种向原种的扩繁，分两种情况。一是母种数量足够进行所需要的原种繁殖，即刻可以开始繁殖原种，另一种是母种数量很少，繁殖原种所需母种数量不够，这就需要对母种进行转管操作。转管是为了扩大母种数量，使母种数量达到制作原种所需要的母种数量。
这样操作可加快扩繁速度，缩短扩繁周期。转管的操作如下:【1】准备试管。试管数量根据你要自繁的菌种级别和数量而定。正常情况抗下，一枚试管可转管制成20~30支试管菌种，一枚试管种可接种8~10瓶（袋）0.5~0.8kg（干基培养基）原种，一瓶（袋）原种可接种20~30袋栽培与原种同样重量的栽培种。通过计算即可知道要准备的试管数量。
【2】PDA培养基制作。①培养基配方。水1000毫升、马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g。按此数量制作的培养基，可装试管20支左右。②煮制培养基。马铃薯去皮切成颗粒状，量杯量取1000毫升水，与马铃薯碎块一起放入铝锅中煮沸，半小时后，多层纱布过滤所煮液体，放进量杯，液体加入琼脂、葡萄糖，搅拌至琼脂融化，水量补足1000毫升。
③装试管并扎捆。趁热把培养基用漏斗装入试管，培养基量至试管的1/5~1/4，盖好胶塞后，用扎绳每7支捆成一捆。④灭菌。试管捆扎完毕，放进高压锅进行高压灭菌。灭菌温度121℃，压力0.105Mpa，这个状态下保持30分钟后，停止灭菌，期间要注意排尽高压锅中的冷气。⑤培养基斜面操作。把试管倾斜放置，让培养基形成斜面，斜面顶部位置在试管长度的1/2处。
试管上应放置厚毛巾等物保温，避免试管内有水珠出现。【3】接种转管。①把试管放入经灭菌处理呈无菌状态的接种箱，做好母种试管消毒灭菌后带入接种箱，再进行一次外壁消毒。②点燃酒精灯，在酒精灯火焰的保护下，打开母种试管和接受转接试管，进行接种，接种完毕立即盖好胶塞。③恒温培养。把接种完毕的试管，放入恒温箱进行培养，一般品种的蘑菇温度保持恒温在22~25℃之间，正常情况下，10~15左右，菌丝就能长满试管。
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